SephadexLH-20为什么在洗脱黄酮类物质的时候,分子量大的先洗脱下来?洗脱其他物质也是这样吗

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/03/29 23:33:54
SephadexLH-20为什么在洗脱黄酮类物质的时候,分子量大的先洗脱下来?洗脱其他物质也是这样吗

SephadexLH-20为什么在洗脱黄酮类物质的时候,分子量大的先洗脱下来?洗脱其他物质也是这样吗
SephadexLH-20为什么在洗脱黄酮类物质的时候,分子量大的先洗脱下来?洗脱其他物质也是这样吗

SephadexLH-20为什么在洗脱黄酮类物质的时候,分子量大的先洗脱下来?洗脱其他物质也是这样吗
主要考虑极性和分子量谁占优势
极性起主导作用时,不一定是分量大的先洗下来

分子筛原理。固定相是带小孔的球球,小分子的容易进入,就能停留,大分子的进不去,先被洗脱下来。谢谢,我现在明白了,SephadexLH-20在洗脱黄酮类的物质的时候,并不是分子筛性质起主导作用,吸附程度是取决于游离酚羟基的数目,数目多的吸附力大,后下来,少的先下来,而其他物质的时候多少分子筛的性质起主导作用...

全部展开

分子筛原理。固定相是带小孔的球球,小分子的容易进入,就能停留,大分子的进不去,先被洗脱下来。

收起

建议你先看一下百度百科的介绍:
转自百度百科
Sephadex LH-20目录
Sephadex LH20简介
Sephadex LH20 的原理
Sephadex LH20 洗脱溶剂
样品的处理和洗脱溶剂的选择
分离的技巧
编辑本段Sephadex LH20简介
  Sephadex LH20是一种价钱较高的填料,特点: ...

全部展开

建议你先看一下百度百科的介绍:
转自百度百科
Sephadex LH-20目录
Sephadex LH20简介
Sephadex LH20 的原理
Sephadex LH20 洗脱溶剂
样品的处理和洗脱溶剂的选择
分离的技巧
编辑本段Sephadex LH20简介
  Sephadex LH20是一种价钱较高的填料,特点: 1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子,可以非常经济地大规模制备各种天然产物 2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身,分离结构非常相近的分子 3、载量可高达300mg样品/ml凝胶,极少需要再生,分离效果可保持十几年不变。
编辑本段Sephadex LH20 的原理
  Sephadex LH20的分离原理主要有两方面:以凝胶过滤作用为主,兼具反相分配的作用(在反相溶剂中)。因为凝胶过滤作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脱下来,小分子的化合物保留强,最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱, Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用,所以极性大的化合物保留弱,先被洗脱下来,极性小的化合物保留强,后出柱。如果使用正相溶剂洗脱,这主要靠凝胶过滤作用来分离。
编辑本段Sephadex LH20 洗脱溶剂
  Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类:反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱,以甲醇--水系统最为常见,先用水,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。正相系统以氯仿--甲醇最为常见,先用50%氯仿--甲醇,逐渐增加甲醇比例,最后用100%甲醇冲柱。
编辑本段样品的处理和洗脱溶剂的选择
  如果样品极性大,这选用反相溶剂洗脱(甲醇--水),样品用最少体积的甲醇--水(尽可能甲醇少一些)溶解,过滤后,湿法上样(一定要滤喔!要是把Sephadex LH20 堵啦,就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去,很心痛呀)。如果样品极性小,这选用正相溶剂洗脱(氯仿--甲醇),样品用最少体积的氯仿--甲醇溶解,过滤后,湿法上样。
编辑本段分离的技巧
  (1) 流速不可太快,切切不可新急,所谓欲速则不达。   (2)柱子尽可能长, Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离,所不要吝惜填料,宁可将填料全装在一根大柱子中,不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力,打击敌人。   (3) 馏分一定要接的细,可1/10,或1/20 个保留体积接成一馏分。   (4) 洗脱体积一般为2-3个保留体积,对特殊保留强的化合物,可洗脱5个保留体积。   (5)鞣质成分死吸附严重,如不在乎填料者,可用Sephadex LH20 分鞣质   (6)Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳,方法很成型,有大量文献参考。   (7)填料反复使用,每次用完,一般可用甲醇将柱子洗干净,然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来,待用。

收起

SephadexLH-20为什么在洗脱黄酮类物质的时候,分子量大的先洗脱下来?洗脱其他物质也是这样吗 为什么在层析中,洗脱速度不能过快或过慢? 蛋白质纯化洗脱在蛋白质纯化时,用PH2.0的酸性buffer洗脱,为什么不担心蛋白会遇酸沉淀 离子分离为什么用不同浓度的洗脱液洗脱 在高效液相里有个“梯度洗脱”请问洗脱的过程怎样?还有,洗脱的组分纯吗? 过柱子时为什么极性小的先下来,在用同一种洗脱剂时? 为什么在洗脱样品时,流速不能太快或太慢 为什么大孔吸附树脂在梯度洗脱时经常产生气泡?rt 在蛋白质提取时,为什么不采用改变PH的梯度洗脱法? 为什么自来水比蒸馏水洗脱能力强一些? 类黄酮为什么用乙醇进行梯度洗脱 对黄酮类化合物进行聚酰胺分离,为什么异黄酮最先洗脱下来?为什么吸脱顺序是 异黄酮,二氢黄酮,查耳酮,二氢黄酮醇,黄酮,黄酮醇? 蛋白质纯化相关问题蛋白质硫酸铵盐析后为什么要透析袋透析后在用葡聚糖G-100过柱洗脱呢?不能直接盐析后就用G-100洗脱呀? 蛋白G纯化为什么在洗脱和平衡的时候分别出现一个波峰最近接到订单,要求proG纯化,在用PH2.5甘氨酸洗脱时出现一个波峰,在洗脱完以后用binding buff 缓冲液平衡柱子的时候又出现了一个波峰,有 聚酰胺色谱法分离黄酮类化合物的原理是什么?洗脱规律有哪些? 乙烯基在高温下为什么变黄? 正相固相萃取柱为什么要用非极性溶剂洗脱 极性大的组分为什么用极性大的洗脱?