为什么我们基因克隆老失败我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/28 03:25:13

为什么我们基因克隆老失败我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开
为什么我们基因克隆老失败
我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开看不出来,所以我们先把PCR产物连在T载体上再切T载体,但是且过之后还是老连不上.有时候转化都长出菌落了但是菌落PCR却做不出来.我们用的T载体有pMD18-T pGM-T pEASY-T.请高人给一些克隆方面的指点吧,我们现在的进度一个月能做成一个克隆就不错了.

为什么我们基因克隆老失败我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开
1 建议你直接切PCR产物,在酶切位点两端加2~3个保护碱基再切.这样避免两次纯化的麻烦.我都是这么做的.
2 你的T载体连接成功了么?就是有没有拿到重组T载体?
3 你用的是Taq还是高保真聚合酶?如果是Taq的话当心是在引物区或酶切位点造成点突变使得切不动.

用TOPO克隆吧。

反正我自己做的时候是 pcr切下来之后做纯化，然后再连接T载体。然后转化，再涂板。我比较落后，还用的是蓝白斑。就可以了。

为什么我们基因克隆老失败我们做的是拟南芥中一些基因cds的克隆,在设计引物时加上酶切位点,PCR之后通过酶切与载体相连.但是为什么老是失败,起初我们直接切得PCR产物,由于那样切没切开拟南芥中某一基因,该基因的产物能与蛋白X相互作用,请设计一个实验,从拟南芥中克隆该基因实验室乙酸乙烯酯的乳液聚合失败的原因整个实验室三组都结块了,我们都是按照实验步骤一步一步做的,为什么会是失败呀? 提取拟南芥抗性基因的实验步骤基因是由什么传递给我们的,基因能做什么克隆的失败事例我们国家为什么没有克隆熊猫? 对于鸦片战争,清政府的失败,请发表看法.如清政府只有失败折条路吗?为什么?(这是我们的历史作业) 基因克隆和DNA克隆是一样的吗? 克隆未知基因的序列,测序后BLAST进行了比对,是我们想要的序列,接下来对序列还要进行什么分析? 拟南芥PCR法复制基因最好的步骤是?生命科学方面的朋友来回答, 基因克隆需要组培方面的内容吗基因克隆方向做组培是为什么呢?做的是早花基因克隆,同时培养未分化的花芽,请问有人知道是为什么吗?是为了测定生理指标吗?查阅一些文献都不知道具体目反对克隆（或克隆人）的理由和原因我们老师要做个活动我们是反方是反对克隆的急用关于反对克隆或克隆人的资料急用翻译：失败对我们是有好处的,我们得祝福灾难,我们是灾难之子. 目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! 克隆的概念为什么译为the concept of cloning而不是clone?clone不是既可以做动词也可以做名词的吗?老师印给我们的讲义上写的是cloning, 《神奇的克隆》给我们的启示? 转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体?