Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/30 06:49:50

Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了
Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了

Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了
你可以是试试,Takara的LA试剂盒!这个我们实验室就是用的这么,TAIL-pcr 不太好用!我觉得!
虽然TALL-PCR有着上述众多的优点,但是它仍然存在着不尽人意的地方： TAIL-PCR反应需要较多的引物组合.此外,由于AP引物存在有限的结合位点,对于个别的侧翼序列,即使使用不同的简并引物也难以扩增到阳性结果.整个TAIL-PCR需要一系列连续的反应,反应条件的设置要求比较精细[51].
1.5.3 利用接头的染色体步移技术
此技术是一个用来扩增基因组中已知序列两侧未知序列的方法.其原理如下：首先,用几种限制性内切酶酶切基因组DNA,然后将酶切后的DNA与体外合成的接头在适当的条件下连接,取适量连接产物直接作为PCR模板进行PCR反应,其中一条引物为接头特异引物,其序列能与接头序列互补,另一条引物为基因特异引物,其序列与已知序列互补.最后将得到的PCR产物测序[53].
根据这个原理,TaKaRa公司推出了LA PCRTM in vitro Cloning试剂盒(DDR015)来克隆基因侧翼未知序列,其流程如图1-4.因为在设计上,Cassette的5′末端没有磷酸基,所以Target DNA的3′末端和Cassette的5′末端的连接部位形成缺口.在第一次PCR反应的第一个循环时,从Primer C1开始的延伸反应在连接部位终止,限制了Primer C1和Primer C1同一引物之间的扩增,从而控制了非特异性PCR扩增.只有从Primer S1开始延伸合成的DNA链,才能成为Primer C1的模板,进行DNA的特异性扩增反应.再用内侧Primer (Primer C2,Primer S2) 进行第二次PCR反应,可以高效特异性地扩增目的DNA[54].

Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了 Tail-PCR未能获得侧翼序列,四种ap引物都试过了,特异引物也重新设计了,还是不行, 用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计什么是侧翼序列什么是侧翼序列侧翼序列包括什么人类的结构基因主要由什么组成a、复制子、外显子、内含子b、侧翼序列、外显子、内含子c、编码序列、非编码序列d、单拷贝序列、编码序列、侧翼序列人类的结构基因主要由下列组成（多选）a、复制子、外显子、内含子b、侧翼序列、外显子、内含子c、编码序列、非编码序列d、单拷贝序列、编码序列、侧翼序列简述四种获得DNA和蛋白质序列的方法. DNA侧翼序列什么意思?生物学. 侧翼序列是否属于内含子? 请问在一段DNA序列中侧翼序列和UTR怎样区别如何使用已知核苷酸序列在DNA和RNA上得到未知的侧翼序列 TAIL-PCR引物是如何结合到模板上的?以分离已知基因的启动子为例,TAIL-pcr 有三个嵌套特异引物结合到已知序列上也就是已知基因上,另外一个随机短引物结合到已知序列上游,如果这样的话就能获得目的基因的方法有多种,以下获得目的基因的方法中,得到的基因与DNA中的实际碱基序列差异最大的是：A：利用PCR技术扩增目的基因B：从基因组文库中获得的目的基因C：从cDNA文库中获得利用LM-PCR获得启动子用连接介导PCR克隆启动子,如何保证开始的限制酶切片段中就包含启动子序列? 在概念上,侧翼序列和基因的左右两臂有什么不同额, 侧翼序列包括顺式作用元件么?终止子和沉默子有什么不同?