我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢因为55度买有扩出条带,所以我就温度往下走,没有往上调,38个循环参数,请问有哪位大侠能

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/05 20:04:44
我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢因为55度买有扩出条带,所以我就温度往下走,没有往上调,38个循环参数,请问有哪位大侠能

我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢因为55度买有扩出条带,所以我就温度往下走,没有往上调,38个循环参数,请问有哪位大侠能
我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢
因为55度买有扩出条带,所以我就温度往下走,没有往上调,38个循环参数,请问有哪位大侠能解决呢?

我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢因为55度买有扩出条带,所以我就温度往下走,没有往上调,38个循环参数,请问有哪位大侠能
这个要看你的实验目的了,你可以根据引物设计时给出的退火温度前后各十度做个温度PCR,然后选择能扩出带的温度.如果二聚体对实验影响较大的话则建议你换引物吧.

你应该试着把退火温度往上调,55,58,61这样,还有你的目的条带是多少啊?我的目标条带是176BP,因为55度没有出条带,但是降低温度之后。54度。53度都有条带了,但是因为有引物二聚体,所以不知道是降低温度好呢,还是升高退火温度好呢,还有其他参数要不要改变?谢谢那些条带会不会全是引物二聚体啊??温度都已经很低了,建议还是试着调高温度做一次吧。176bp,25个循环都已经足够了,除非表达量太低了...

全部展开

你应该试着把退火温度往上调,55,58,61这样,还有你的目的条带是多少啊?

收起

你的退火温度已经挺低的哦,循环数也不小,如何还扩不出来可能就是表达量太少,不好扩,建议用realtime PCR试试

我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢因为55度买有扩出条带,所以我就温度往下走,没有往上调,38个循环参数,请问有哪位大侠能 我做逆转录时选用随机引物,那么做cDNA扩增时的特异性引物怎么获取呢? 特异引物PCR问题各位大牛,小弟初涉分子生物实验,最近在用设计好的特异性引物扩增保守序列,可是总也是扩增不出来,常常是只有引物二聚体,没有任何扩增条带,我也试着在引物报告单上所给 同一模版DNA在进行PCR扩增时是不是需要不同的两种引物?为什么资料上说引物只要Tm值相似就行? 引物的Tm值是什么 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 引物是如何扩增形成引物二聚体的? 谁能通俗易懂的给我解释一下PCR反应过程中,引物与模板如何结合?扩增出来的是上下游引物之间的片段呢?还是就是引物片段?最终目的不是扩增目的基因,观察多态性的. pcr反应体系如何建立?我做的是基因组的pcr,想扩增其中一个基因的一段,我设计的引物 上游 GCGTCGACTACAGCCTGTTTCAGCACTT 其中tm值是60.3 G和C的含量是 53.6下游 GCCTTAAGCACCCATTGCACATTCCA 其中tm值是58.3 G和C的 引物的TM值如何计算 如何计算引物的Tm值? 如何计算引物的Tm值? 我想问我扩增出来的条带大多是非特异性带,而且还有引物二聚体出现?怎么办? 我之前是自己设计的引物,可是没有扩增出来片段,最后就选择用文献中的引物. PCR扩增退火温度确定引物F:SIZE:20 TM56.9 %GC:55引物R:size:29 TM67 %GC:55根据TM=4*(G+C)+2(A+T)-5它的退火温度是多少?本人小菜鸟一枚,请教高手,主要是不懂从订单上怎么确定G+C及A+T的含量?我知道有 关于ISSR引物我现在打算做ISSR扩增,我有100个样品,但是不知道该购买多少引物,以及该买哪些序列的引物,希望大家能帮帮忙给个意见,我的100个是我提的DNA样品,不是引物。我还没买引物,你的 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? 什么是PCR引物的特异性