qRT-PCR中标准曲线制作及浓度梯度问题要做qRT-PCR,但是不太清楚,1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗?2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线?也就是说如果我要作10个基因的话

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/06 01:02:05
qRT-PCR中标准曲线制作及浓度梯度问题要做qRT-PCR,但是不太清楚,1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗?2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线?也就是说如果我要作10个基因的话

qRT-PCR中标准曲线制作及浓度梯度问题要做qRT-PCR,但是不太清楚,1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗?2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线?也就是说如果我要作10个基因的话
qRT-PCR中标准曲线制作及浓度梯度问题
要做qRT-PCR,但是不太清楚,1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗?2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线?也就是说如果我要作10个基因的话,就要制作内参加目的基因共11个标准曲线?3：怎么确定最适合的cDNA模板浓度呢?4：有说作3个生物学重复,我是小白,请大家不吝赐教啊

qRT-PCR中标准曲线制作及浓度梯度问题要做qRT-PCR,但是不太清楚,1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗?2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线?也就是说如果我要作10个基因的话
浓度梯度是用来做标准曲线的,对于你没有使用过的引物,做一次相对定量的标准曲线,可以计算出你引物的扩增效率,你检查10个基因,如果做相对定量的话,每个基因的检测引物的扩增效率都应该是一样的,这样项规定量的数学模型才能成立,cDNA的模板浓度这个随意性很大,主要是你要检测的目的基因,如果你的目的基因浓度很低,你的总cDNA的用量肯定要比标准的多,反之亦然.等到你所有的实验条件都优化好了在考虑三个生物学重复吧.

  1. 是的，标准曲线法是绝对定量法

  2. 不是，既然用到了内参，就是相对定量了

  3. 反转录的时候按照试剂盒的要求转录特定质量的RNA（RNA的浓度可以通过分光光度计测定），反转完后按照推荐的比例稀释产物即可，一般确保你要的基因的Ct值在20~25比较理想

  4. 对于同一类生物样本，提取三份RNA（每份RNA都...

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    1. 是的，标准曲线法是绝对定量法

    2. 不是，既然用到了内参，就是相对定量了

    3. 反转录的时候按照试剂盒的要求转录特定质量的RNA（RNA的浓度可以通过分光光度计测定），反转完后按照推荐的比例稀释产物即可，一般确保你要的基因的Ct值在20~25比较理想

    4. 对于同一类生物样本，提取三份RNA（每份RNA都应包含若干不同的生物个体）并反转录，分别Q，这叫生物学重复；Q同一个基因的时候平行3个加样孔，这叫技术重复

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qRT-PCR中标准曲线制作及浓度梯度问题要做qRT-PCR,但是不太清楚,1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗?2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线?也就是说如果我要作10个基因的话 如何制作气相色谱标准曲线如何用亚麻酸标准品制作气相色谱标准曲线?怎样设计浓度梯度? 【交流】做标准曲线 如何设定浓度梯度? 【交流】做标准曲线 如何设定浓度梯度? real-time PCR相对定量2 -△△CT法中用来判断扩增效率的标准曲线怎么制作?相对定量2 -△△CT法中建立标准曲线的目的是用来检测PCR的扩增效率的,那么这个标准曲线是如何制作的?我将未知浓度 荧光定量PCR 标准曲线的制作 是不是可以软件自动生成的! 怎么绘制亚硝酸钠标准曲线,亚硝酸钠的浓度梯度该是多少 标准PCR过程及常见问题 生物化学中标准工作曲线制作的注意事项有哪些? HPLC标准曲线的制作 如何在气相色谱进行脂肪酸分析测定时制作标准曲线我想分析组织中的脂肪酸成分,制作标准曲线时脂肪酸标准品是什么,及标准曲线的制作 本人制作的实时定量PCR标准曲线总不成线性关系,个别样本的浓度达不到设置的标准浓度,请问是什么原因. 怎么判断实时荧光定量PCR标准曲线是否准确 定量PCR标准曲线的线性关系不佳怎么办? 为什么要做real-time pcr 标准曲线 蛋白质分子量标准曲线如何制作? 液相色谱如何制作标准曲线 做realtime-pcr时,绝对定量标准曲线的制作我第一次做realtime pcr,是做转基因拷贝数的鉴定.我是拿到公司去做,但是公司要求提供做绝对定量标准曲线的标准品,标准品该怎么制备?我查了一些文献,