在做载体构建的时候,PCR时有目的条带,但是摇菌酶切没有东西,请问是怎么回事啊?

在做载体构建的时候,PCR时有目的条带,但是摇菌酶切没有东西,请问是怎么回事啊? 有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因? 我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 为什么篮斑做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢我用蓝白斑做的 T载体和目的片段连,为什么篮斑的 做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢? 我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带!这是为神马?只连这个穿梭载体就已经连了两个月了,我快崩溃了! 构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和已经预先双酶切的目的载体连接,那么?先前的目的基因为什么不直接和目的载体相连呢?为什 PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带 PCR跑出的条带与目的条带不同怎么办 高保真酶PCR没有结果我用高保真酶做PCR的时候没有目的条带,但是同样的条件下用Taq酶条带就很亮,这是为什么呢? PCR跑出非特异条带?怎么办?1楼做PCR的时候加了水为模板,做为阴性对照.可是居然跑出了跟目的条带大小一样的条带,只是淡了一些.目的片段大小就100bp左右.可能是什么原因呢?做PCR的水要求高 菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确? 在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么? 用pet32a构建表达载体,目的片段是220bp左右,酶切是ecor1和hindlll,但酶切连接转菌提质粒后却只有2000bp做过pcr验证有目的条带,想不明白是为什么.2个月了,求救 关于PCR产物酶切要构建一个载体目的基因PCR回收后做双酶切应该做多大的体系50 or 100?各种成分为多少?望大家不吝赐教!谢谢! 用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑 [菌液PCR,测序,DNA提取,求助]菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确? 转基因得到了转化苗,做PCR的时候,如果质粒P出了阳性 对照的基因组没有条带 是不是就能确定没转进去基因第一次做的时候,质粒是阳性的,样品有2个在目的片段那也出现了条带,但很暗,后来再 基因工程得到目的基因,反转录+pcr后用电泳检测,到底能检测出什么?电泳检测后就直接可以做克隆载体dna?电泳得到的dna条带应该不纯吧