外源基因连接T载体导入到大肠杆菌,那么外源基因能在大肠杆菌中表达吗?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/27 16:43:33
外源基因连接T载体导入到大肠杆菌,那么外源基因能在大肠杆菌中表达吗?

外源基因连接T载体导入到大肠杆菌,那么外源基因能在大肠杆菌中表达吗?
外源基因连接T载体导入到大肠杆菌,那么外源基因能在大肠杆菌中表达吗?

外源基因连接T载体导入到大肠杆菌,那么外源基因能在大肠杆菌中表达吗?
可以的,因为它上面有启动子T7/SP6（哪个我忘记了）.
但是T载体一般不用做表达载体,因为它是靠T-A连接的（T载体上含多个T,PCR产物含多聚A）,读码框未必正确,所以一般是用作中间过渡的载体,后续要把这段基因切下来（你的扩增引物上需要设计酶切位点,保证读码框正确）,换到专门的表达载体去才行.

主要看连接外源基因的启动子是否可以在原核细胞中表达。T载体连接外源基因的前端是没有启动子的，在大肠杆菌中不表达，一般是作为基因克隆的中间载体使用。

根据课本中基因工程的讲述，外源基因在一定条件下能表达

T载体的种类很多,如果的pUC18之类克隆载体改造的,其中一个方向有启动子,外源片段可能被转录成mRNA,在特定条件下,比如目的基因插入方向以及与ALPHA片段融合而没有改变读码框,将会表达得到融合蛋白,如果插入片段本身带有SD序列,在被正确形成mRNA的情况下,可能表达得到非融合形式的蛋白.如果插入片段本身带有启动子或者载体两侧带有宿主可识别的启动子(特别地，DE3宿主会微弱表达T7 RNA聚合...

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T载体的种类很多,如果的pUC18之类克隆载体改造的,其中一个方向有启动子,外源片段可能被转录成mRNA,在特定条件下,比如目的基因插入方向以及与ALPHA片段融合而没有改变读码框,将会表达得到融合蛋白,如果插入片段本身带有SD序列,在被正确形成mRNA的情况下,可能表达得到非融合形式的蛋白.如果插入片段本身带有启动子或者载体两侧带有宿主可识别的启动子(特别地，DE3宿主会微弱表达T7 RNA聚合酶，识别pGEM系列克隆载体的T载体上的T7启动子），这样的情况下，两个方向都会被转录得到mRNA，再分析SD序列之类可能影响翻译的因素就可以知道了。

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