菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/29 21:37:15

菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多
菌液直接PCR
我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多少,菌液体积应加多少,其他还要做什么修改,做出来和煮模板做区别大吗?

菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多
其实你原体系中7微升都太多了.我做50微升体系最多加3微升模板.
菌液PCR只需要用枪头沾取菌落,或者加入2微升左右菌液即可.预变性时间可稍微延长.如果引物特异性好的话,和用DNA模板效果差不多.

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鉴定为目的的菌落PCR，我通常只用20μL体系，20μL体系就够了，不就是看个有没有嘛，多了浪费试剂。
20μL里面作为模版的菌液，我只加0.2~0.3μL（1%~1.5%，尽量减少对PCR体系的干扰，而且可以减小非特异性结合的发生）；如果是固体菌落，那更是微乎其微——事实上更少的体积都没问题，但是2.5μL的枪最小只能到0.2μL，0.1μL那是扯淡。
变性时间，如果按1%加的话，只需要95℃总共3分钟就绰绰有余了，也就是2.5min+第一个循环的0.5min
PS：
如果你用的是含Mg2+的培养基，那加多了菌液会把体系的Mg2+浓度提高，将替PCR的特异性。
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菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多 PCR 怎样稀释做50微升体系的PCR使用的引物浓度是多少?怎样稀释? pcr 25微升体系的各种组分具体是怎么加的? pcr反应体系中引物浓度20uM指的是什么,还有20微升体系怎么换算成50微升体系呢, PCR产物的电泳条带不够亮,为何?如何优化PCR反应体系我用的25微升的反应体系请问我的电泳图跑成这样,是为什么?我的模板用的是第一次PCR的产物,体系总共是60微升,模板2微我的第一次PCR用的是质粒DNA 而且产物条带还行一般PCR产物浓度能达到多少ng每微升我只测了一下纯化回收后的,才10+ng每微升,不知道是不是试剂盒回收效率太低我的片段500bp,PCR程序33个循环,50体系 mtDNA进行pcr扩增 25微升体系的电泳结果全部都出想要的一条亮带但是做了50微升体系的之后跑电泳许多不出条带要不就是有拖带这种情况是怎么回事 pcr技术的反应体系? PCR反应体系中dNTP的浓度怎么算?我的反应总体积20微升,其中加1.0微升dNTP,装有dNTP管上写的10mM,1mL. 如何增加PCR产物?我得PCR扩增循环数是30个,扩增体系是15微升,其中NTP的浓度是1.5,引物和酶都是1,模板是1.2,镁离子的浓度是1.0.能扩出目的条带,但是琼脂糖电泳条带不是很亮,即目的条带的量不 PCR扩增时,25微升体系一般加引物多少? 25微升PCR体系中,两种引物分别加0.5微升,那么所添加的引物的浓度是多少?几摩尔每升?不问终浓度,问的是加入体系之前那0.5微升的引物其浓度几何? PCR反应体系的主要成分包括什么? 请教高手关于移液枪的使用现在跑PCR,25微升体系,有两把枪,一把20ul的,一把100ul的,先把体系混合好了再分装入每个PCR管,最后加酶.现在有个问题是,是用20ul的枪调成25ul去加样,还是用100ul的枪调为什么PCR仪上要设PCR反应体系大小,如果20ul的体系在PCR仪上用50ul来跑,会有什么结果 2%琼脂糖凝胶电泳检测/分离DNA时凝胶的厚度DNA上样量50微升,凝胶的厚度应为多少?样品为PCR扩增产物,目的是要回收,做二次PCR 【跪求】我的PCR体系应该怎么设定?退火温度?我做一种真菌的pcr,引物序列左：aatcgacccgtttccgcctt, 右：gttagattgaccgcgattcc,生工合成单给的退火温度分别是59.85和57.8我的25微升体